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动物饲料中的脲素和氨态氮
动物饲料
- 尿素酶法
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A 试剂
A.a 去泡液
抗泡B乳剂。
A.b 尿素酶溶液
溶解标定过的尿素酶于水中配制新鲜溶液,使得每10ml中性溶液含有能转变成大于等于0.1g纯尿素的氮。
A.b.1 标定
为测定市售尿素酶制品的碱性,溶解0.1g于50ml水中,以甲基红为指示剂,用0.1N HCl滴定。在制备尿素酶溶液时,向每份0.1g尿素酶中加入同样体积的0.1N HCl。为了测定酶的活性,制备约50ml 1%的中性溶液。加入不同量的溶液到0.1g样品纯尿素中,往下的步骤按测定中所述的酶消化和进行蒸馏。如同用蒸馏法测定氮的完全回收那样从完全转变成尿素的尿素酶溶液的量来计算尿素酶制品的活性。
A.c 氯化钙溶液
溶解25g CaCl2于100ml水中。
B 测定
将2g样品放入盛有约250ml水的克氏瓶中。加入10ml尿素酶溶液,塞紧,在室温下放置1h,或在40℃放置20min。如有必要,冷却至室温。如果饲料中含有大于5%尿素〔相当于约12%的蛋白质〕,则应使用更多的尿素酶溶液。用几毫升水淋洗塞子和瓶颈。加入大于等于2g MgO〔重型〕、5ml CaCl2溶液和3ml去泡液,以克氏连接球管将瓶子与冷凝器连接在一起。蒸馏出100ml蒸馏液到准确测定体积的标准酸中,以甲基红为指示剂,用标准碱滴定。