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动物饲料中的尿素
动物饲料
- 比色法
- 〔适用于动物饲料及它们的成分〕
A 仪器
A.a 分光光度计
仪器在420nm处最大频带宽度为2.4nm,配有1cm的吸收池。
B 试剂
B.a 对二甲胺基苯甲醛〔DMAB〕溶液
溶解16.00g于1L乙醇中,加入100ml HCl。稳定一个月,对每一批新试剂应绘制新的标准曲线。
B.b 醋酸锌溶液
溶解22.0g Zn(OAc)2·2H2O于水中,加入3ml HOAc,稀释至100ml。
B.c 亚铁氰化钾溶液
溶解10.6g K4Fe(CN)6·3H2O于水中,稀释至100ml。
B.d 木炭
B.e 磷酸盐缓冲溶液
pH7.0,分别用约100ml新蒸馏水溶解3.403g无水KH2PO4和4.355g无水K2HPO4,合并两溶液并用水稀释至1L。
B.f 尿素标准溶液
B.f.1 贮备液
5mg/ml。溶解5.000±0.001g试剂级尿素于水中,用水稀至1L。
B.f.2 工作溶液
分别用移液管移取2,4,6,8,10,12,14,16,18和20ml贮备液放入250ml容量瓶中,用磷酸盐缓冲溶液稀至刻度配成0.2,0.4,0.6,0.8,1.0,1.2,1.4,1.6,1.8和2.0mg尿素/5ml的溶液。
B.f.3 参考溶液
使用含有1.0mg尿素/5ml的标准溶液作为参考溶液,保存温度小于24℃,稳定一个星期。
C 标准曲线的制备
移取5ml一份的各标准工作溶液,分别放入20×150mm〔25ml〕试管,向每个试管中加入5ml DMAB溶液。制备含有5ml缓冲溶液和5ml DMAB溶液的试剂空白。充分振荡试管,放在25℃水浴中15min。以试管空白调零,于420nm用1cm比色皿测定吸光度A。以A对尿素浓度作图得到直线;如果不成直线,使用新批号DMAB,重新制作工作曲线。
D 测定
称取1g磨碎的样品,放入500ml容量瓶内。加入1g木炭、约250ml水、5ml Zn(OAc)2溶液及5ml K4Fe(CN)6溶液。机械振荡30min,用水稀释至刻度。放置使沉淀沉降。通过Whatman 40号滤纸倾析过滤,收集清晰的滤液。移取5ml滤液放入试管中。加入5ml DMAB溶液,充分振荡。每组样品包括参考标准(5ml溶液(f)中〔3〕和5ml DMAB)和试剂空白。在25℃水浴上放置10min,以试剂空白为对照在420nm处测定吸收光度A。$$%尿素=(1.0×A^^样品^^×100)/(A^^标准^^×一份溶液中样品毫克数)