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动物蛋白质饲料中的胃蛋白酶消化性
动物饲料
- 过滤法
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A 原理
在不断搅拌下，将去脂肪样品与胃蛋白酶的热溶液一起消化16h。不溶性剩余物用过滤法分离，洗涤，干燥，称量以测得剩余物的百分含量，剩余物用显微镜观察并用做蛋白质的分析。过滤法应用于所有动物蛋白质。因为有不能被胃蛋白酶消化的复杂的碳氢化合物和其它化合物的存在，该法不适用于植物蛋白质或混合饲料。
B 仪器
B.a 搅拌器
能够连续动转，慢速(15r/min)，立式滚筒型，能够操作45±2℃的内部培育器，附有250ml带螺帽的药剂瓶或相当的搅拌器和瓶子。不能用回转或往复〔振荡〕式搅拌器，因为固体颗粒可能聚集在瓶子的侧面不能与胃蛋白酶溶液接触。如果由于搅拌器马达发热使培育器温度上升到高于45℃，则将马达装在培育器的外部，可在培育器的侧面钻一个孔，用加长的传动轴和偶合装置与搅拌器相连接。
B.b 沉降台
能够放置消化瓶并使之成45度角的木架或金属架。可以用两块木板在水平方向钉成“V”形、木板的末端截成互相垂直而制得。
B.c 过滤装置
改进的加利福尼亚布氏漏斗〔如果盘边粗糙，用小尖的烙铁将其修整光滑〕，使用护筒，2×2.75"外径的不锈钢管。
B.d 玻璃纤维过滤器
7cm。
B.e 湿度盘
铝制，78mm外径×20mm，具有外盘盖及垂直的侧壁。
C 试剂
胃蛋白酶－0.2%胃蛋白酶〔活度1：10，000〕的0.075N HCl的溶液；不要使用胃蛋白酶NF或其活度不是1：10，000的胃蛋白酶。在使用前现配，稀释6.1ml HCl到1L，加热到42－45℃，加入胃蛋白酶，慢慢搅动到溶解为止。不要在电热板上加热胃蛋白酶溶液，不要过热。
D 样品的制备
用20号筛将样品过筛。磨碎不能过筛的样品使其全部通过20号筛。将样品合在一起，放在500ml罐中振摇以使样品混匀。必须完全混合好。因为许多动物制品含有很高的脂肪，不过筛就研磨会粘在磨里，失去水分或脂肪，或者样品不能均匀混合。
E 提取
用11cm Whatman 2号滤纸或相当的滤纸制备提取筒套如下：将滤纸对折，打开滤纸，在与原来折痕垂直的方向对折一下，将滤纸翻转过来，在与原来折痕成45℃的方向重复折叠。将折好的滤纸放在一个手里，在纸中心放进一个短试管〔直径比放进套筒的提取器样品容器或杯子小6－8mm〕。沿着自然折线将滤纸在试管周围折成4角星形。在相同方向上围绕试管裹起各点，做成了套筒。$$称取1.000g磨碎的样品〔取0.500g禽类副产物或水解羽毛类，因为这些样品有胶性和一定量的残渣〕，放入筒套中。用乙醚以3－4滴/s的冷凝速度提取1h〔如果使用Soxhlet提取器，筒套的顶部应该伸到虹吸管的上方，以避免损失固体颗粒。如果装有样品的纸完全浸没在虹吸管的杯中，试管应该被纸完全裹住〕，观察乙醚提取液以确定无固体颗粒被带进溶剂中。为了测定近似的脂肪含量，则蒸去乙醚，干燥并称量残渣。从样品容器或杯中取出纸包，在室温下干燥。把纸包摊开，将脱脂样品刷进消化瓶中，要避免刷毛和滤纸纤维的沾污。使用粉末漏斗可有效地避免损失。
F 胃蛋白酶的消化
向在搅拌器瓶中的脱脂样品加入150ml预热到42－45℃的新鲜配制的胃蛋白酶溶液。要保证样品完全被胃蛋白酶润湿。塞住瓶子，夹在搅拌器上，在45℃不断搅拌16h。
G 残渣的处理
在打开盖子和110℃下于湿度盘中干燥各个玻璃纤维过滤器(d)。盖上盖子在保干燥中冷却30min，称重〔W1〕。$$在搅拌器上取下瓶子，放在45度角的沉降台上，拧松盖子。使残余物沉降15min以上。将称量过的过滤器放在加利福尼亚布氏漏斗(c)中，抽吸，用水使之润湿。将护套放在过滤器上，轻轻地下压。用少量水将盖子上的残渣颗粒淋洗进过滤器。从沉降台上取下瓶子，以与在沉降台上同样的角度转移到过滤器处，用持续的细流将溶液慢慢倒入过滤器，要避免一切不必要的搅动，液体通过滤纸的速度与倒进过滤器的速度一样快。直到全部或实际上全部液体通过滤纸后，滤纸才被残渣完全覆盖住。如果过滤速度较慢，可以按下述加入丙酮洗的方法来加快，但是只能用于加入丙酮后没有明显量的消化混合物留在漏斗上的情况。〔中蛋白质量最大时过滤〔通过过滤器过滤含水混合物〕也应该在1min内完成〕。在清液通过过滤器后，按下法将残渣定量转移到过滤器上：$$向瓶子里加入15ml丙酮，用拇指压住瓶口猛烈振荡，挪开在瓶口上的拇指，释放压力，在过滤器上以相反的位置振荡瓶子。放开手指，使丙酮和残渣倒进过滤器。用第二份15ml丙醇重复淋洗，振荡，象上述那样释放压力，仔细观察瓶子，是否再进一步用丙酮淋洗，如有必要，可用帚。如果在开始用丙酮淋洗时，有3mm以上的液体留在滤纸上，就有必要用3份15ml丙酮淋洗而不是用2份来淋洗，以增加过滤速度。$$在全部液体通过漏斗后，用洗瓶或皮下注射器以2小份丙酮冲洗残余物和护套内部，抽干。从漏斗上除下护套，将漏斗转移到原来的湿度盘里，将所有残渣颗粒或粘结到护套上的或漏斗上面的物质擦或刷到湿度盘中的过滤器上。在烘箱里干燥，冷却，象前边一样称量〔W2〕，计算$$%不可消化的残渣＝〔W1－W2〕×100/g样品$$直接转移过滤器中的残渣到克氏瓶内以测量不可消化的蛋白质。〔注意：当NaOH与稀的消化混合物混合在一起时，可能发生猛烈的反应，这是由于对残渣中少量有机物和不含有机物的玻璃过滤器使用了大量过量的H2SO4。为了避免发生这个情况，在加入NaOH之前，要充分地混合及冷却消化混合物，或者在克氏瓶中加入20ml H2SO4而不是25ml H2SO4〕。如果有必要，进行一个玻璃过滤器的空白测定，从每个样品的测定值中减去此值。基于原来样品的重量，计算蛋白质的百分含量。此结果表示样品中未消化的蛋白质的百分含量。换算成样品中未消化的粗蛋白质的百分含量。$$未消化的蛋白质＝%样品中未消化的蛋白质×100/(%样品中总的粗蛋白质)
