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猪组织中磺胺二甲嘧啶残留物
动物组织中的药物和饲料添加剂
- 气相色谱法
- 〔应用于残留物大于等于0.1ppm〕
A 原理
用丙酮-CHCl3提取组织，加1N HCl，蒸发溶液。用已烷洗水溶液，调pH到5.55－5.65，用CH2Cl2提取磺胺二甲嘧啶，用重氮甲烷甲基化，用电子捕获GC测定。
B 试剂和仪器
用MeOH彻底清洗全部玻璃仪器，放干。适用于农药分析的玻璃仪器蒸馏溶剂。
B.a 磺胺二甲嘧啶标准溶液
制备含量为1，2和10μg磺胺二甲嘧啶USP/ml丙酮的标准溶液。
B.b 重氮甲烷衍生试剂
注意：重氮甲烷有毒，能产生特殊的过敏，是一种潜在的爆炸物。在通风橱中制备重氮甲烷，甲基化及蒸发。避免使用磨砂玻璃接口，腐蚀或破损的玻璃仪器以及锋利带刃的仪器。在冰箱中保存重氮甲烷；不要直接暴露在阳光或强人造光下。用21.5gN-甲基-N-硝基-P-甲苯磺酰胺的加醚的碱性溶液蒸馏，用200ml醚制备重氮甲烷。在蒸馏第2份(40ml)醚后，通过漏斗将重氮甲烷醚溶液转入细口瓶，用多重密封帽盖紧，保存在冰箱中。在冰箱中保存时，溶液可保持其作为甲基化试剂的有效性不少于1个月。
B.c 气相色谱
Tracor 222型，或相当仪器，带有^63^N线性电子捕获检测器和6ft×2mm内径，填充涂有5%OV-7 100－200目Gas Chrom Q〔或相当填充剂〕的玻璃柱。操作条件：注射口290℃，柱恒温箱260℃；检测器290℃；氩-甲烷(90+10)载气30ml/min；检测器清洁气20ml/min。甲基化的磺胺二甲嘧啶的保留时间是4－4.5min。替换柱：6ft×4mm内径，填充5%OV-25。
B.d 食品切碎机。
B.e 瓶
100ml梨形，24/40接口。
C 操作
把组织切成1.5in^3^的片，在塑料袋中冷冻。在Hobart食品切碎机杯中粉碎足量干冰使杯和磨碎机彻底变冷。慢慢加小量〔约50g〕样品连续切磨直到全部样品都被切碎。若必要可加更多的干冰以便在切磨过程中保持样品冷冻。将样品保存在冷冻器中〔－20℉〕直到干冰消失。$$将15g样品转到搅拌器，用150ml丙酮-CHCl3(1+1)中速搅拌5min。通过玻璃纤维滤纸过滤，收集第一份100ml滤液到100ml刻度瓶。把100ml等分液〔相当于10g样品〕转到250ml有24/40接口的圆底烧瓶，加10ml 1N HCl。把瓶浸入32±4℃H2O浴中，在旋转真空蒸发器上蒸发有机溶剂〔对肌肉和脂肪，有些提取出的脂肪将防止溶剂完全除去〕。加50ml n-已烷到1N HCl相，把两相都定量转到125ml分离器。再加5ml 1N HCl淋洗蒸发烧瓶、转移淋洗液到125ml分离器。每秒钟翻转分液漏斗并返回直立位置1次，轻摇分离器内容物50s。固定漏斗直至相分离〔约10min〕。把下层相〔1N HCl)放入第2个125ml分离器。〕为避免水解过程中能引起乳化溶液的转移可能需要离心〕。用5ml 1N HCl洗圆底烧瓶，转入第一个含已烷的分离器，混匀并如上分离。把HCl相放入第2个分离器，弃去已烷。只对高脂肪样品，加15ml CH2Cl2到第二个分液漏斗中的HCl相。摇30s，使相分离。放出并弃去下层CH2Cl2相。加25ml饱和柠檬酸三钠水溶液缓冲分离器中HCl萃取物。然后加3N NaOH用pH计调节pH到5.55－5.65〔约2.5ml〕。加15ml CH2Cl2入分离器，猛烈摇荡90s，使相分离，将下层CH2Cl2转入100ml梨形瓶。第一次萃取后，检查水相pH，若必要再调到5.55－5.65。用类似方法，再用3份CH2Cl2萃取，将萃取物合并于100ml梨形瓶中。用25－30℃H2O浴，在旋转蒸发器中蒸发溶剂，不要超过30℃。可在此状态下保持样品过夜。$$用1.0ml丙酮溶解残渣，旋动瓶子溶解瓶壁上残渣。在通风橱中，加1ml重氮甲烷衍生试剂，放置15min，不时轻轻摇动。在缓和氮气流下蒸发溶剂。将残渣溶于1.0ml丙酮。$$移取1.0ml各等分磺胺二甲嘧啶标准溶液分别放入100ml梨形瓶，制备甲基化标样，加1ml重氮甲烷衍生试剂，按样品同样处理。
D 气相色谱
注射2－8μl甲基化的1μg/ml磺胺二甲嘧啶标样到气相色谱仪〔得到峰高应是30－40%FSD)。注射3个样品，继之以与样品相似的标样。若样品峰超出标尺，用丙酮定量稀释甲基化样品，给出30－60%FSD的响应，校正稀释结果。磺胺二甲嘧啶，$$ppm＝1.5(A×C×V')/(A'×W×V)$$式中A，A'分别为样品和标样的峰面积；V，V'分别为样品和标样的GC注射体积(μL)；C标样浓度(μg磺胺二甲嘧啶/ml)；W样品重量(g)；1.5为150/100对于分析所取150ml样品萃取液的100ml等分样的校正。方法可准确定量0.1ppm以上的磺胺二甲嘧啶。
